जीवाणु संक्रमण की विविधता के लिए रोगज़नक़ की स्पष्ट पहचान और उसकी प्रजातियों की परिभाषा की आवश्यकता होती है। सूक्ष्मजीव के प्रकार को निर्धारित करने के लिए, सूक्ष्म जीवविज्ञानी इसके टिंक्टोरियल गुणों से मदद करते हैं - विभिन्न रंगों के साथ धुंधला होने के लिए सूक्ष्म जीव की संवेदनशीलता। यह विधि आपको रोगज़नक़ की आकृति विज्ञान का पता लगाने की अनुमति देती है। सूक्ष्म जीव विज्ञान के क्षेत्र में व्यावहारिक और सैद्धांतिक अनुसंधान के लिए जीवाणुओं के टिंक्टोरियल गुणों का बहुत महत्व है।
माइक्रोबियल अनुसंधान
बैक्टीरियोलॉजी में सूक्ष्मजीवों को धुंधला करने की कई विधियाँ हैं। ये सभी बैक्टीरिया के टिंक्टोरियल गुणों पर आधारित हैं। धुंधला हो जाना आपको उनके आकार, संरचना, आकार, सापेक्ष स्थिति को निर्धारित करने की अनुमति देता है। यह सामान्य जीव विज्ञान और तुलनात्मक सूक्ष्म जीव विज्ञान के सूक्ष्मजीवों के प्रकार को व्यवस्थित करने की समस्याओं को हल करने की अनुमति देता है।
उन्हें पेंट क्यों करें
जीवाणु व्यावहारिक रूप से होते हैंपारदर्शी जीव, और धुंधला के उपयोग के बिना, वे पारंपरिक माइक्रोस्कोपी के लिए खराब दिखाई देते हैं। आप वस्तुओं का अध्ययन करने के लिए विशेष प्रकार की माइक्रोस्कोपी (फेज कंट्रास्ट, डार्क फील्ड) का उपयोग कर सकते हैं, लेकिन दाग लगाना सबसे आसान तरीका है, जिसके बाद बैक्टीरिया एक पारंपरिक प्रकाश माइक्रोस्कोप में दिखाई देने लगते हैं।
नमूना तैयार करना
स्टेनिंग तकनीक का उपयोग किए बिना, अध्ययन के तहत वस्तु तैयार करने के लिए एक समान नियम हैं। निम्नलिखित चरण अनिवार्य हैं:
- बाँझ उपकरण कांच की स्लाइड पर धब्बा बनाते हैं।
- नमूना सुखाया जा रहा है। यह कमरे के तापमान पर या सुखाने वाले अलमारियाँ का उपयोग करके किया जाता है।
- फिक्सेशन चरण के बाद - सूक्ष्मजीव विशेष यौगिकों के साथ कांच से जुड़े होते हैं।
- उचित धुंधलापन - नमूने को एक निश्चित अवधि के लिए डाई से ढक दिया जाता है, जिसके बाद इसे धो दिया जाता है।
- अंतिम सुखाने - नमूना फिर से सुखाया जाता है।
सबसे आम रंग
सबसे अधिक इस्तेमाल किया जाने वाला रंग विभिन्न एसिड वैल्यू (पीएच) के साथ एनिलिन पर आधारित होता है। अधिकांश डाई पाउडर होते हैं जो अल्कोहल में पतला होते हैं।
जिन रंगों में धनायन रंग देने वाले एजेंट होते हैं, उन्हें बेसिक (7 से अधिक पीएच) कहा जाता है। उनका उपयोग सूक्ष्मजीवों को लाल (मैजेंटा, सफ़्रानिन), वायलेट (मिथाइल वायलेट, थियोनाइन), नीला (मेथिलीन नीला), हरा (मैलाकाइट हरा), भूरा (क्राइसोइडिन) और काला (इंडुलिन) रंगों में दागने के लिए किया जा सकता है।
ऐसे रंग जिनमें रंग देने वाले एजेंट आयन होते हैं, अम्लीय (pH 7 से कम) कहलाते हैं। वे नमूने को लाल (ईओसिन), पीला (पिक्रिन), या काला (निग्रोसिन) दाग देंगे।
तटस्थ रंगों का एक समूह है (उदाहरण के लिए, रोडामाइन बी), जहां दोनों धनायन और आयन रंग एजेंट के रूप में कार्य करते हैं।
संस्कृति मृत या जीवित
धुंधलापन के तरीकों को परीक्षण नमूने के जीवन स्वरूप के अनुसार दो समूहों में बांटा गया है।
- महत्वपूर्ण (आजीवन) धुंधला हो जाना। सूक्ष्मजीवों के गुणों के अध्ययन की इस पद्धति का उपयोग जीवित ऊतकों के अध्ययन में किया जाता है, जिससे रोगाणुओं की महत्वपूर्ण प्रक्रियाओं का निरीक्षण करना संभव हो जाता है। इस धुंधलापन के लिए, कम विषाक्तता और उच्च मर्मज्ञ शक्ति वाले रंगों का उपयोग किया जाता है।
- पोस्ट-महत्वपूर्ण धुंधलापन। यह मृत या मारे गए सूक्ष्मजीवों का धुंधलापन है। बैक्टीरिया के टिंक्टोरियल गुणों के लिए धन्यवाद, सूक्ष्म जीवविज्ञानी उनकी संरचना का निर्धारण करते हैं। यह धुंधलापन है जो सबसे अधिक व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है।
ग्राम-पॉजिटिव और ग्राम-नेगेटिव
बैक्टीरिया की ये विशेषताएं हैं जो विभिन्न दवाओं के निर्देशों में पाई जा सकती हैं। जीवाणुओं के टिंक्टोरियल गुणों का अध्ययन करने की यह विधि जेंटियन वायलेट डाई और आयोडीन निर्धारण के उपयोग पर आधारित है। यह डेनिश चिकित्सक हैंस क्रिश्चियन ग्राम की तकनीक है, जिन्होंने इसे 1884 में प्रस्तावित किया था। इस धुंधलापन के परिणामस्वरूप, बैक्टीरिया दो समूहों में विभाजित हो जाते हैं:
- ग्राम (+) - नीला हो जाना(स्टैफिलोकोकी और स्ट्रेप्टोकोकी)।
- ग्राम (-) - दाग गुलाबी से लाल (एंटरोबैक्टीरिया, साल्मोनेला, ई. कोलाई)।
विभिन्न धुंधला परिणाम बैक्टीरिया की दीवारों के विभिन्न टिंचोरियल गुणों के कारण होते हैं। कुछ संक्रामक रोगों के निदान में ग्राम दाग विधि अभी भी मुख्य है।
अन्य धुंधला तकनीक
जीवाणु विज्ञान में व्यापक रूप से उपयोग की जाने वाली कुछ और विधियों की विशेषता बताते हैं।
- ज़ीहल-नेल्सन विधि - बैक्टीरिया के एसिड प्रतिरोध को निर्धारित करती है। यह तपेदिक और माइकोबैक्टीरियोसिस के प्रेरक एजेंटों की पहचान करता है।
- रोमानोव्स्की-गिमेसा तकनीक - एसिडोफिलिक (एसिटिक एसिड और लैक्टिक एसिड) बैक्टीरिया को लाल, और बेसोफिलिक (स्पाइरोकेट्स और प्रोटोजोआ) को नीला रंग देता है।
- मोरोज़ोव की तकनीक - बैक्टीरिया को भूरे रंग का दाग देती है और उनके कशाभ को दृश्यमान बनाती है।
बीजाणु देखे जा सकते हैं
Tsiel का फ्यूचिन धुंधला हो जाना आपको बैक्टीरिया के बीजाणुओं को देखने की अनुमति देता है। धुंधला होने के बाद गुलाबी रंग होने पर, वे नीले बैक्टीरिया की पृष्ठभूमि के खिलाफ स्पष्ट रूप से दिखाई देते हैं। यह विधि बैक्टीरियोलॉजी का एक उपकरण भी है और बहुत व्यावहारिक महत्व की है।
